DIABETES TIPO 1 Y PCR

El trabajo realizado por los investigadores alrededor del orbe ha permitido entender mejor a la DM en lo que respecta a la

etiología, mecanismos fisiopatológicos y la aproximación diagnóstica y terapéutica. Con el impresionante desarrollo de la
biología molecular en las últimas décadas, el panorama del conocimiento cambio radicalmente. El diagnóstico molecular
se lleva a cabo por medio de la PCR, empleando ADN extraído del paciente, posteriormente, se amplifica el gen
candidato empleando iniciadores (primers) especificos de este gen, el cual se le considera un marcador molecular.


Un marcador molecular se define como un gen o una proteína que presenta ciertas características como: a) participa solo en una vía de señalización, b) presenta polimorfismos o c) variantes génicas se expresan en cierta condición o enfermedad, solo por mencionar algunas características. Por ejemplo, se logro identificar genes/proteínas que participan tanto en la  secreción de insulina en respuesta a una concentración de glucosa plasmática, como en la vía de señalización

intracelular para la acción de esta hormona, por lo que cada uno de esos genes pudiera ser un gen candidato para considerarlo como un marcador molecular.

ARTICULO RELACIONADO: Asociación del locus IDDM2 (región polimórfica de repeticiones en tamdem en numero variable situada en el extremo 5 del gen de la insulina 11p15.5) en la población española con diabetes tipo 1.
Objetivo: Amplificar el locus IDDM2 en familias españolas con diabetes tipo1  y su asociación con el  riesgo de desarrollar diabetes tipo 1.

Muestra: sangre periférica

ADN: genómico

PCR: Nested

El gen de la insulina fue amplificado mediante la reacción en cadena de la polimerasa con los oligonucleótidos 5FP1 y 5FP2 que flanquean la región VNTR.

Los productos obtenidos se separaron por electroforesis en un gel de poliacrilamida desnaturalizante al 3,5% y se detectaron mediante tinción con plata.

En función del tamaño obtenido, los alelos se clasificaron en clases I o III. Para subtipar los alelos de clase I las muestras de ADN fueron amplificadas con los oligonucleótidos VNTR5 y VNTR6

La electroforesis se llevó a cabo en geles de poliacrilamida desnaturalizante al 6% en un secuenciador automático ALFexpress.
CONCLUSIONES:  el estudio de el locus IDDM2 en la población española permitió observar que el genotipo homozigoto clase I/I asociado con el doble riesgo a desarrollar diabetes tipo 1, es menor al observado en otras poblaciones, lo cual podría ser explicado por la alta prevalencia en la población general de España de alelos clase I que no predisponen la enfermedad

DIABETES TIPO 1- DIAGNOSTICO

   

   

 La diabetes mellitus (DM) es un grupo de enfermedades metabólicas caracterizadas por :

Hiperglucemia secundaria a un defecto absoluto o relativo en la secreción de insulina, que se acompaña, en mayor o menor medida, de alteraciones en el metabolismo de los lípidos y de las proteínas, lo que conlleva una afectación microvascular y macrovascular que afecta a diferentes órganos como ojos, riñón, nervios, corazón y vasos.

 

En la clasificación actual, la DM1 se subdivide en dos subtipos:

      DM1 A o autoinmune: enfermedad autoinmune en la que existe una destrucción selectiva de las células del páncreas mediada por linfocitos T activados en sujetos con haplotipos HLA de predisposición.

     DM1 B o idiopática: engloba a aquellos pacientes con mismas o iguales características, en los    que no se encuentran datos de autoinmunidad ni haplotipos HLA de predisposición.

En 90% de los pacientes se detectan anticuerpos anti-islotes(ICA), anti-decarboxilasa del ácido glutámico (antiGAD), anti-insulina (IAA) y transmembrana tirosin-fosfatasa (IA-2); 10% de los casos son considerados idiopáticos y no presentan marcadores serológicos de autoinmunidad.

 



ALGORITMO DIAGNOSTICO
 

La DM tipo A o autoinmune se relaciona con la destrucción de las células B del islote de Langerhans pancreatico, generalmente como consecuencia de una respuesta autoinmune contra determinadas moléculas del islote: insulina, glutamato- descarboxilasa, tirosian- fosfatasa (IA-2), carboxipeptidasa H; ICA 69, etc.

Los autoanticuerpos contra estos antígenos pueden ser detectados en el suero de pacientes con DM1, y esto ha sido utilizado como una ayuda en el diagnóstico, en la clasificación y en la predicción de la enfermedad.

 

Los autoanticuerpos pueden ser detectados incluso durante la fase prodrómica, como en el caso de la DM1 tipo A, durante la cual aunque todavía no se den síntomas clínicos se está llevando a cabo una destrucción de las células

β. Además es posible usar estos autoanticuerpos como marcadores de actividad de enfermedad, y su medición pueden ayudar a definir la naturaleza de la diabetes, proporcionando marcadores para clasificarla en autoinmune o no, según la presencia o ausencia de anticuerpos asociados a la enfermedad.

 

 

Mecanismos Genéticos se vinculan a la diabetes tipo 1

Las personas desarrollan diabetes tipo 1 cuando su sistema inmune busca y destruye las células ß del páncreas, productoras de insulina. La interacción de los factores medioambientales con una serie de variantes genéticas tiene como resultado la alteración del sistema inmune, que provoca la afección. Tony Merriman nos habla de los enfoques que se utilizan para identificar los genes que hacen que una persona sea susceptible de desarrollar diabetes tipo 1. 

  Genes implicados:

1.- Genes del MHC

         a.- DR3 y DR4  tienen un riesgo entre 10 y 20 veces superior de desarrollar la afección.
          b.- Variante DR2, tienen una fuerte protección ante la diabetes tipo 1:

•Aparece en un 1% de los niños con DM1

•La protección conferida por el haplotipo parece ser dominante.

•El efecto de este alelo podría ser menos potente en poblaciones no caucásicas, como en la raza negra y en la raza hispana.

•Probablemente existan otros alelos HLA que ofrezcan protección frente a DM1. Sin embargo, su baja frecuencia en la población general dificulta su estudio, ya que son necesarios tamaños muestrales grandes para analizar su efecto.

 2-  gen de la insulina personas con más repeticiones están más predispuestas a desarrollar diabetes tipo 1:

 

El locus IDDM2 incluye un número variable de repeticiones entándem (variable number of tandem repeats, VNTR) en el cromosoma 11p15, en el minisatelite 5’ del gen de la insulina.

Los polimorfismos en esta región no codificante del gen de la insulina están asociados con riesgo de DM1.
•Existen tres tipos principales de VNTR de insulina.

Clase I (26-63 repeticiones),clase II (aproximadamente 80 repeticiones),clase III (140-200 repeticiones).
•Estos polimorfismos influyen en la cantidad de ARN mensajero de insulina detectable en el timo, lo que podría constituir la base fisiopatogénica de su influencia sobre el riesgo de DM1.

        Los alelos VNTR de clase III están asociados con mayor expresión de ARN mensajero de insulina en el timo, y la transcripción de insulina en el timo se correlaciona de forma inversa con susceptibilidad para diabetes autoinmune, tanto en humanos como en modelos animales transgénicos

3- Tipo de actividad de los linfocitos T es el eje de enfermedades autoinmunes (autolesiones) como la diabetes tipo 1, por lo tanto que tenga un efecto critico sobre los linfocitos T afectara a dichas enfermedades.

4- Gen CTLA- 4  en el en el cromosoma 2q33,como gen que determina la susceptibilidad de desarrollar diabetes.

•El gen CTLA-4 es un candidato fuerte, debido a que su producto proteico está involucrado en el control de la actividad de los linfocitos T.

•Las variantes del CTLA-4 ya habían sido asociadas previamente, si bien de manera inconsistente, a la diabetes tipo 1, en una serie de poblaciones.

•Las múltiples variaciones descritas entre poblaciones limitan la utilidad de este locus.